Pseudomonas testosteroni
凍結乾燥物
25 units/mg 以上(タンパク質1 mg当りの国際単位)
pH8.9、25℃においてNADの存在下、1分間に基質Testosterone 1μmolを酸化するに要する酵素量を1 unitとする。
5℃以下で保存すれば、12ヶ月間活性の低下は殆ど認められない。室温でも少なくとも1週間は安定である。
なお、凍結保存(−20℃)すれば、長期間安定に保存できる。
Malate dehydrogenase
< 0.01%
Lactate dehydrogenase
< 0.01%
Alcohol dehydrogenase
< 0.01%
3α-Hydroxysteroid dehydrogenase
約 0.1 %
分子量
約 80,000 Da
至適pH
10.1〜10.3
至適温度
34℃
pH安定性
7.0〜8.7
熱安定性
42℃以下(pH7.2, 10 min)
Km値
2.5×10
-6
M (Testosterone)
1.8×10
-4
M (NAD)
光路 1 cm のキュベット中に100 mM ピロリン酸緩衝液(pH8.9) 1.0 ml、15 mM NAD溶液(pH7.0〜7.5) 0.2 ml、蒸留水 1.6 ml、及び酵素液 0.1 ml(約 0.4 unit/ml)を加え、25℃に 平衡化後、3 mM Testosterone-メタノール溶液 0.1 ml を加えて直ちに反応を開始し、対照の蒸留水に対して 340 nmでの初期吸光度増加(反応開始後 30〜90秒間の1分間の ΔA340)を読み取り、活性は計算式:
unit/キュベット
= ΔA340/min×3÷6.22
3
= キュベット中の液量(ml)
6.22
= NADHのミリモル分子吸光係数
により算出する。なお、酵素の希釈としては 0.1% Bovine serum albuminを含む緩衝液(30 mM リン酸緩衝液、pH7.2)を使用する。
10 units, 50 units